Midasin Lentiviral Activation Particles (h): sc-411690-LAC

Das humane MDN1-Gen kodiert Midasin, eine große AAA+-ATPase, die für die nukleäre Ribosomenbiogenese essenziell ist. Midasin koordiniert die Spätphasen der Reifung und Qualitätskontrolle der 60S-präribosomalen Untereinheit, indem es ATP-abhängiges Remodeling sowie die Freisetzung von Assemblierungsfaktoren antreibt und so die Funktion des Nukleolus mit Proteostase und Zellzyklusprogression verknüpft. Über seine Rolle in der Ribosomenproduktion und der translationalen Kapazität beeinflusst die MDN1-Aktivität Wachstums-Kontrollwege und zelluläre Stressantworten. Eine Störung oder Fehlregulation der Ribosomenbiogenese-Maschinerie, einschließlich MDN1-assoziierter Prozesse, ist für Studien zur Genomstabilität, zu proliferativen Phänotypen und zu ribosomopathie-ähnlichen Mechanismen in Krankheitsmodellen relevant.

Midasin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MDN1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Midasin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MDN1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Midasin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MDN1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.