Partículas Lentivirales de Activación (h2) MIAT: sc-437346-LAC-2

El MIAT humano (transcrito asociado al infarto de miocardio) es un ARN largo no codificante que funciona como un andamiaje regulador en el núcleo y el citoplasma, modulando la expresión génica mediante interacciones con complejos asociados a la cromatina y actuando también como ARN endógeno competidor que secuestra microARN. Influye en programas celulares clave, incluidos el control transcripcional, el procesamiento de ARN, la progresión del ciclo celular, la apoptosis y las respuestas al estrés, con efectos posteriores sobre redes de señalización implicadas en la biología vascular, la diferenciación neuronal y la regulación de la inflamación. Se ha descrito una expresión desregulada de MIAT en contextos cardiovasculares y neurodegenerativos, así como en múltiples tipos de cáncer, donde se asocia con proliferación alterada, angiogénesis y decisiones del destino celular. La edición génica o la perturbación de MIAT permite la disección mecanística de circuitos reguladores mediados por lncARN, el mapeo de ejes microARN–lncARN–ARNm y estudios funcionales utilizando modelos celulares humanos relevantes para la enfermedad y lecturas transcriptómicas/epigenómicas.

Las partículas de activación lentiviral MIAT (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MIAT (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MIAT. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.