Plásmido Doble Nickase (h) Mi2-b: sc-402185-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Mi2-b consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Mi2-b (h) y el plásmido de doble nickasa Mi2-b (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CHD4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Mi2-β Anticuerpo (H-7): sc-393647
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Mi2-b | sc-402185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Mi2-b | sc-402185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHD4 (Mi2-β) es un remodelador de cromatina dependiente de ATP y una subunidad central del complejo NuRD (remodelación de nucleosomas y desacetilación) que acopla el deslizamiento de nucleosomas con la desacetilación de histonas para regular la represión transcripcional y la accesibilidad de la cromatina. Participa en la señalización y reparación del daño en el ADN, en las respuestas al estrés replicativo y en el mantenimiento de la estabilidad genómica mediante el control coordinado de la estructura de la cromatina. Mi2-β influye en la especificación de linaje y la progresión del ciclo celular al moldear los estados de potenciadores y promotores a lo largo de redes génicas reguladas durante el desarrollo. La alteración de la función de CHD4/NuRD se ha vinculado con programas epigenéticos desregulados observados en la biología del cáncer y con fenotipos del neurodesarrollo en estudios genéticos.
Mi2-b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHD4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHD4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHD4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHD4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.