Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) MGMT: sc-400720-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MGMT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MGMT Double Nickase (h) et le plasmide MGMT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MGMT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MGMT Antibody (E-1): sc-166528
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MGMT | sc-400720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MGMT | sc-400720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’O6‑méthylguanine‑ADN méthyltransférase (MGMT) est une enzyme de réparation directe de l’ADN qui élimine les adduits alkyles en position O6 de la guanine en transférant la lésion sur une cystéine du site actif, au cours d’une réaction « suicide » à usage unique. Cette activité protège l’intégrité du génome en empêchant les erreurs d’appariement et les cassures double brin associées à la réplication qui peuvent résulter de la persistance de lésions d’O6‑alkylguanine. MGMT agit au sein d’un réseau plus large de réponse aux dommages de l’ADN et de réparation, en interface avec le stress de réplication et le traitement des dommages d’alkylation dépendant de la réparation des mésappariements. Les modifications de l’expression de MGMT ou la méthylation de son promoteur sont largement étudiées comme déterminants des réponses cellulaires aux dommages alkylants, et sont pertinentes pour la biologie tumorale, les signatures mutationnelles et les interactions entre voies de réparation de l’ADN.
MGMT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MGMT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MGMT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MGMT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MGMT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.