Plásmido Doble Nickase (m) METTL3: sc-425096-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)METTL3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa METTL3 (m) y el plásmido de doble nickasa METTL3 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Mettl3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) METTL3 | sc-425096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) METTL3 | sc-425096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mettl3 codifica METTL3, el núcleo catalítico del complejo “writer” de N6‑metiladenosina (m6A) del ARNm, que deposita marcas m6A en ARN codificantes y no codificantes para modular el empalme (splicing) del ARN, la exportación nuclear, la traducción y la degradación. En células de ratón, la remodelación de m6A dependiente de METTL3 se integra con programas transcripcionales y vías de vigilancia del ARN para moldear decisiones de destino celular, respuestas al estrés y especificación de linajes. La actividad alterada de METTL3 se ha vinculado con un control epitranscriptómico desregulado en fenotipos del desarrollo y en contextos relevantes para enfermedades, incluidas la señalización oncogénica, la regulación inmunitaria y la neurobiología. Como regulador epitranscriptómico central, METTL3 se estudia con frecuencia para conectar la metilación del ARN con cambios a nivel de vías en proliferación, diferenciación y metabolismo del ARN.
METTL3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mettl3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mettl3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mettl3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mettl3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.