Partículas Lentivirales de Activación (h) Mel-CAM: sc-401020-LAC

MCAM codifica Mel-CAM (CD146), una molécula de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas presente en la superficie celular que regula las interacciones célula–célula y célula–matriz, la organización de las uniones endoteliales y la remodelación del citoesqueleto. Mel-CAM participa en procesos relacionados con la biología vascular, como la angiogénesis, la transmigración de leucocitos y la función de barrera, y se ha asociado con programas de señalización que convergen en la dinámica de las adhesiones focales y en la motilidad mediada por GTPasas de la familia Rho. La expresión desregulada de MCAM se estudia con frecuencia en el contexto de la progresión tumoral y la metástasis, la biología del melanoma y la inflamación vascular, donde la alteración de la adhesión y la migración contribuye a los fenotipos de enfermedad. Además, MCAM se utiliza como marcador para analizar estados de células endoteliales y perivasculares y para perfilar la heterogeneidad dentro de los microambientes estromales e inmunitarios.

Las partículas de activación lentiviral Mel-CAM (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MCAM en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Mel-CAM (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MCAM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Mel-CAM. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MCAM y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.