Mel-CAM Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401020-LAC

MCAM codifica a Mel-CAM (CD146), uma molécula de adesão da superfamília das imunoglobulinas presente na superfície celular, que regula as interações célula–célula e célula–matriz, a organização das junções endoteliais e a remodelação do citoesqueleto. A Mel-CAM participa de processos ligados à biologia vascular, incluindo angiogênese, transmigração de leucócitos e função de barreira, e tem sido associada a programas de sinalização que convergem para a dinâmica das adesões focais e para a motilidade mediada por GTPases da família Rho. A expressão desregulada de MCAM é frequentemente estudada no contexto da progressão tumoral e metástase, da biologia do melanoma e da inflamação vascular, em que alterações de adesão e migração contribuem para fenótipos de doença. Além disso, MCAM é usada como marcador para investigar estados de células endoteliais e perivasculares e para traçar o perfil da heterogeneidade em microambientes estromais e imunes.

As Partículas de Ativação Lentivirais Mel-CAM (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MCAM numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Mel-CAM (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MCAM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Mel-CAM. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MCAM e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.