Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Mel-CAM Double Nickase Plasmid (h): sc-401020-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mel-CAM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mel-CAM Double-Nickase-Plasmid (h) und Mel-CAM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MCAM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mel-CAM: sc-18837
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mel-CAM Double Nickase Plasmid (h) | sc-401020-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mel-CAM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401020-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCAM kodiert Mel-CAM (CD146), ein Zelloberflächen-Adhäsionsmolekül der Immunglobulin-Superfamilie, das auf Endothelzellen sowie auf Teilpopulationen von Immun- und Stromazellen exprimiert wird. Mel-CAM ist an Zell–Zell- und Zell–Matrix-Interaktionen beteiligt, die den Umbau des Zytoskeletts, die Migration und die Organisation von Zellkontakten beeinflussen, mit nachgeschalteten Effekten auf die Gefäßbiologie und den entzündlichen Zellverkehr. MCAM wird mit Prozessen in Verbindung gebracht, die mit Angiogenese und epithelial–mesenchymal-ähnlichen phänotypischen Veränderungen verknüpft sind, indem es Signale aus der extrazellulären Umgebung integriert, um Programme zu Motilität und Invasion zu regulieren. Eine dysregulierte MCAM-Expression wird häufig in Modellen zur Tumorprogression und Metastasierung untersucht und ist zudem für vaskuläre Dysfunktionen sowie eine immunvermittelte Pathobiologie relevant.
Mel-CAM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MCAM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MCAM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MCAM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MCAM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.