Plásmido Doble Nickase (h) Mel-CAM: sc-401020-NIC

MCAM codifica Mel-CAM (CD146), una molécula de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas presente en la superficie celular, expresada en células endoteliales y en subpoblaciones de células inmunitarias y estromales. Mel-CAM participa en interacciones célula–célula y célula–matriz que influyen en la remodelación del citoesqueleto, la migración y la organización de las uniones, con efectos posteriores sobre la biología vascular y el tráfico inflamatorio. MCAM se ha implicado en procesos relacionados con la angiogénesis y con cambios fenotípicos tipo transición epitelio-mesenquimal, integrando señales del entorno extracelular para regular programas asociados a la motilidad y la invasión. La expresión desregulada de MCAM se estudia con frecuencia en modelos de progresión tumoral y metástasis, y también es relevante para la disfunción vascular y la patobiología mediada por el sistema inmunitario.

Mel-CAM El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCAM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCAM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCAM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCAM alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.