Mel-18 Plasmide Double Nickase (m): sc-423764-NIC

Pcgf2 codifica Mel-18, una proteina RING finger del gruppo Polycomb che opera all’interno dei complessi PRC1 canonici per regolare la compattazione della cromatina e la repressione trascrizionale tramite l’ubiquitinazione dell’istone H2A e la cooperazione con la marcatura H3K27me3 depositata da PRC2. Nelle cellule di topo, Mel-18 contribuisce a programmi stabili di silenziamento genico che modellano il patterning dello sviluppo, lo stato di cellule staminali e progenitrici e il controllo del ciclo cellulare, modulando l’accessibilità in loci che specificano la linea cellulare. Influenzando reti dipendenti da Polycomb, Pcgf2 incide sulle traiettorie di differenziamento e sulla memoria epigenetica, processi spesso alterati in modelli di trasformazione oncogenica e di disregolazione immunitaria. La perturbazione genetica di Pcgf2 viene quindi utilizzata per analizzare la specificità delle subunità di PRC1, i cambiamenti nella topologia della cromatina e gli output trascrizionali dipendenti dal contesto.

Mel-18 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pcgf2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pcgf2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pcgf2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pcgf2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.