MEK Kinase 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-401107-KO-2

概要

MAP3K1 は、ストレス応答性 MAPK シグナル伝達の上流制御因子として機能するセリン／スレオニン型 MAP キナーゼキナーゼキナーゼである MEK kinase 1（MEKK1）をコードします。MEKK1 は、サイトカイン、増殖因子受容体、細胞骨格の撹乱といった刺激を統合し、JNK および p38 の活性化へと至るリン酸化カスケードを駆動することで、アポトーシス、分化、炎症応答を制御する転写プログラムの形成に関与します。さらに本タンパク質は、ユビキチン依存的シグナル伝達や NF-κB 関連経路とも連携し、受容体近傍のシグナル複合体を下流の遺伝子発現へ結び付けます。MAP3K1 シグナルの破綻は、細胞運命決定の変化やストレス応答ネットワークの異常と関連しており、がん化や発生・発達の文脈で関与が示唆されています。

MEK Kinase 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるMAP3K1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAP3K1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAP3K1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MEK Kinase 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MEK Kinase 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAP3K1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MEK Kinase 1の機能に不可欠なMAP3K1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAP3K1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MEK Kinase 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMEK Kinase 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAP3K1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MEK Kinase 1 HDRプラスミド（h）および MEK Kinase 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAP3K1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAP3K1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。