Plasmide Double Nickase (h) MEK-7: sc-402363-NIC

MAP2K7 code pour MEK-7, une MAP kinase kinase à double spécificité qui phosphoryle et active préférentiellement les isoformes de JNK, reliant divers signaux extracellulaires de stress et de cytokines à une reprogrammation transcriptionnelle. MEK-7 fonctionne au sein de la cascade MAPK aux côtés des MAP3K en amont pour réguler l’apoptose, la signalisation inflammatoire et le remodelage du cytosquelette via des cibles en aval telles que c-JUN et des facteurs de transcription de la famille ATF. La perturbation de la signalisation JNK dépendante de MAP2K7 a été associée à des réponses immunitaires altérées et à des phénotypes oncogènes dans de multiples contextes tissulaires, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer le contrôle des voies activées par le stress. MEK-7 humain est donc largement étudié dans des modèles d’inflammation, de neurobiologie et de signalisation des cellules cancéreuses, où la spécificité des voies et la dynamique de signalisation sont cruciales.

MEK-7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAP2K7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAP2K7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAP2K7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAP2K7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.