Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEK-6: sc-402544-ACT

MAP2K6 code la kinase humaine à double spécificité MEK-6 (MKK6), un composant central de la cascade MAPK qui phosphoryle et active les MAPK p38 en réponse aux cytokines inflammatoires, au stress oxydatif et à des facteurs de stress environnementaux. Via la signalisation p38, MEK-6 influence des programmes transcriptionnels contrôlant les réponses immunitaires innées, l’apoptose, la différenciation et les points de contrôle du cycle cellulaire. Une activité dérégulée de la voie MAP2K6–p38 a été associée à une production de cytokines altérée et à des phénotypes d’adaptation au stress observés dans diverses maladies inflammatoires et dans plusieurs contextes cancéreux. En tant que nœud amont, MEK-6 constitue un levier exploitable pour disséquer l’orientation de la voie et l’intégration de signaux spécifiques au stimulus.

MEK-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP2K6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEK-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP2K6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP2K6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEK-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP2K6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEK-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEK-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP2K6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.