MEK-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400397-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MEK-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MEK-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MEK-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MAP2K1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MEK-1: sc-6250
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MEK-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MEK-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP2K1 kodiert MEK-1, eine Kinase mit dualer Substratspezifität, die ERK1/2 innerhalb der kanonischen RAS–RAF–MEK–ERK-MAPK-Kaskade phosphoryliert und aktiviert. MEK-1 integriert Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen und anderen upstream gelegenen Inputs, um über ERK-abhängige Effektoren Proliferation, Differenzierung, Überleben und Transkriptionsprogramme zu regulieren. Eine fehlregulierte MAP2K1/MEK-1-Signalgebung trägt zur aberranten MAPK-Signalwegaktivität bei, die in verschiedensten Krebsmodellen und Entwicklungsstörungen beobachtet wird, weshalb MAP2K1/MEK-1 häufig als Knotenpunkt zur Untersuchung der Signalwegverschaltung und der Feedback-Regulation genutzt wird. In menschlichen Zellen liefert eine Perturbation von MAP2K1 einen gut messbaren Readout der MAPK-Signaldynamik, einschließlich ERK-Phosphorylierung und nachgeschalteter Veränderungen der Genexpression.
MEK-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAP2K1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAP2K1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAP2K1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAP2K1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.