Plásmido CRISPR de Activación (h) MCT9: sc-409073-ACT

SLC16A9 codifica el transportador de monocarboxilatos 9 (MCT9), un transportador de membrana de la familia de carriers de solutos 16 implicado en el movimiento transmembrana de pequeños ácidos orgánicos y metabolitos relacionados. MCT9 contribuye a la homeostasis metabólica celular al influir en la disponibilidad de sustratos para la oxidación mitocondrial, el equilibrio redox y procesos más amplios de detección de nutrientes. Los patrones de expresión y las asociaciones genéticas vinculan a SLC16A9 con la regulación sistémica de metabolitos, incluido el manejo del urato y la fisiología del transporte asociada al riñón. Por ello, SLC16A9 se estudia con frecuencia en el contexto de rasgos y trastornos metabólicos en los que la alteración del flujo de metabolitos y de la actividad de los transportadores moldea la función celular y tisular.

MCT9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC16A9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MCT9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC16A9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC16A9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MCT9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC16A9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MCT9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MCT9 en células tumorales con expresión de SLC16A9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.