Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) MCM3: sc-402076-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MCM3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MCM3 (h) y el plásmido de doble nickasa MCM3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MCM3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MCM3 Anticuerpo (E-8): sc-390480
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MCM3 | sc-402076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MCM3 | sc-402076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCM3 codifica el componente 3 del complejo de mantenimiento de minicromosomas, una subunidad central de la helicasa MCM2–7 necesaria para el licenciamiento de los orígenes y la progresión de la horquilla de replicación del ADN durante la fase S. Como parte del complejo de prerreplicación, MCM3 se coordina con CDC45 y GINS para impulsar el ensamblaje del replisoma, contribuyendo a la estabilidad del genoma y a una duplicación fiel de los cromosomas. La alteración de las dinámicas de replicación dependientes de MCM3 puede promover estrés replicativo, modificar los puntos de control del ciclo celular y favorecer la acumulación de daño en el ADN, procesos que se investigan con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer y de trastornos proliferativos. Por ello, MCM3 se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar el control de la replicación del ADN, las respuestas al estrés replicativo y la regulación del ciclo celular.
MCM3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCM3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCM3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCM3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCM3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.