Plásmido Doble Nickase (h) MCM2: sc-400959-NIC

MCM2 codifica una subunidad central del complejo helicasa de mantenimiento de minicírculos cromosómicos (MCM2–7), que autoriza los orígenes de replicación del ADN e impulsa la progresión de la horquilla de replicación durante la fase S. Mediante su acción coordinada con CDC45 y el complejo GINS, MCM2 favorece el ensamblaje del replisoma, las respuestas al estrés replicativo y el acoplamiento de la síntesis de ADN con la señalización de los puntos de control. La alteración o la expresión desregulada de MCM2 puede perturbar la estabilidad del genoma, aumentar el estrés replicativo y modificar programas de control del ciclo celular, aspectos que se estudian con frecuencia en trastornos proliferativos. Como marcador de células en ciclo, MCM2 se utiliza ampliamente para investigar la dinámica de la replicación, los estados de autorización asociados a la cromatina y los mecanismos de tolerancia al daño del ADN.

MCM2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCM2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.