Plasmide CRISPR/Cas9 KO MC1-R (h): sc-402152

Présentation

MC1R code le récepteur de la mélanocortine 1 (MC1‑R), un récepteur couplé aux protéines G principalement exprimé dans les mélanocytes, qui s’associe à Gαs pour stimuler l’adénylate cyclase et augmenter l’AMPc. L’activation de la signalisation via MC1‑R favorise la synthèse d’eumélanine et soutient les programmes de pigmentation par l’intermédiaire de régulateurs en aval tels que MITF, tout en s’articulant avec des réponses de stress cellulaire, notamment les voies liées aux dommages oxydatifs et induits par les UV. Les variations ou la dérégulation de MC1R sont associées à des phénotypes pigmentaires altérés et ont été largement étudiées pour leur lien avec la susceptibilité au mélanome et d’autres pathologies cutanées liées aux UV. Au-delà de la pigmentation, la signalisation de MC1‑R est également étudiée dans l’inflammation et la biologie du réseau des mélanocortines, offrant un point d’entrée mécanistique pour l’étude de la signalisation des récepteurs et des voies des GPCR.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MC1-R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MC1R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MC1R, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MC1R à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MC1-R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MC1R pour l'étude de la signalisation de MC1-R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MC1R essentiels à la fonction de MC1-R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MC1R pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MC1-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MC1-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MC1R. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MC1-R plasmide HDR (h) et le MC1-R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MC1R pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MC1R définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.