Plasmide CRISPR/Cas9 KO MBLAC2 (h): sc-406416

Présentation

MBLAC2 code une protéine contenant un domaine de métallo-β-lactamase, impliquée dans des réactions hydrolytiques dépendantes des métaux ainsi que dans des processus de détoxification cellulaire. L’activité enzymatique prédite suggère un rôle dans la régulation du métabolisme des petites molécules et le maintien de l’homéostasie cellulaire en conditions de stress oxydatif ou d’exposition à des xénobiotiques. Des modifications d’expression de membres de la famille des métallo-β-lactamases ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui justifie l’étude de MBLAC2 dans des voies liées aux réponses au stress, au remodelage métabolique et à la survie cellulaire. Des études fonctionnelles de MBLAC2 peuvent éclairer la manière dont les processus associés aux métallohydrolases s’articulent avec les réseaux métaboliques mitochondriaux et cytosoliques dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MBLAC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MBLAC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MBLAC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MBLAC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MBLAC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MBLAC2 pour l'étude de la signalisation de MBLAC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MBLAC2 essentiels à la fonction de MBLAC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MBLAC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MBLAC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MBLAC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MBLAC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MBLAC2 plasmide HDR (h) et le MBLAC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MBLAC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MBLAC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.