Matriptase Lentiviral Activation Particles (h): sc-402971-LAC

Das humane ST14-Gen kodiert Matriptase, eine Typ-II-Transmembran-Serinprotease, die die perizelluläre Proteolyse an der Zelloberfläche reguliert. Matriptase ist an der Homöostase und dem Umbau der epithelialen Barriere beteiligt, indem sie Substrate wie den Pro-Hepatozyten-Wachstumsfaktor aktiviert und proteaseaktivierte Rezeptor-Signalwege (PAR) anstößt sowie extrazellulärmatrixassoziierte Proteine prozessiert. Über diese Aktivitäten beeinflusst sie Zelladhäsion, Migration und Programme der epithelialen Differenzierung und ist damit relevant für fehlregulierte Proteasenetzwerke, wie sie bei epithelialen Entzündungen und in der Krebsbiologie beobachtet werden. Die Funktion von ST14 wird häufig im Kontext des Protease-Inhibitor-Gleichgewichts, membranverankerter proteolytischer Kaskaden und der Integrität epithelialer Gewebe untersucht.

Matriptase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ST14-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Matriptase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ST14-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Matriptase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ST14-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.