Plasmide CRISPR/Cas9 KO Matrilin-1 (h): sc-406830

Présentation

MATN1 code la matriline-1, une protéine adaptatrice de la matrice extracellulaire enrichie dans le cartilage, qui aide à organiser la matrice péricellulaire en reliant les collagènes et les protéoglycanes en réseaux supramoléculaires. La matriline-1 contribue à la différenciation des chondrocytes, à l’intégrité structurelle du cartilage et à l’assemblage de la matrice extracellulaire lors de la squelettogenèse et de l’ossification endochondrale. Grâce à ses domaines modulaires et à sa multimerisation, elle participe aux processus de remodelage de la matrice qui influencent la biomécanique des tissus et la signalisation cellule–matrice. Les altérations de l’expression de MATN1 ou de l’organisation de la matrice sont étudiées dans le contexte de la dégénérescence du cartilage et de troubles squelettiques et articulaires héréditaires ou acquis, où l’homéostasie de la matrice extracellulaire est perturbée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Matrilin-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MATN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MATN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MATN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Matrilin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MATN1 pour l'étude de la signalisation de Matrilin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MATN1 essentiels à la fonction de Matrilin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MATN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Matrilin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Matrilin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MATN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Matrilin-1 plasmide HDR (h) et le Matrilin-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MATN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MATN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.