MAT Iα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419102

Panoramica

Mat1a codifica la metionina adenosiltransferasi I alfa (MAT Iα), il principale enzima epatico che catalizza la sintesi della S-adenosil-L-metionina (SAM), il principale donatore di gruppi metile per le reazioni di metilazione di DNA, RNA, proteine e lipidi. Attraverso il controllo dell’equilibrio SAM/SAH, MAT Iα collega il metabolismo della metionina al metabolismo a un carbonio, alla transsolfurazione e all’omeostasi redox, influenzando la regolazione epigenetica e la capacità globale di metilazione. Un’alterata attività di MAT1A è associata a programmi di espressione genica dipendenti dalla metilazione deregolati e a risposte allo stress metabolico, rendendola rilevante per studi sulla fisiologia epatica, la differenziazione degli epatociti e i meccanismi della disfunzione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAT Iα (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mat1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mat1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mat1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAT Iα.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mat1a per lo studio della segnalazione di MAT Iα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mat1a critici per la funzione di MAT Iα
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mat1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MAT Iα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MAT Iα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mat1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MAT Iα Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MAT Iα (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mat1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mat1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.