Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAS1: sc-401674-ACT

MAS1 (MAS1 proto-oncogène, récepteur couplé aux protéines G) code le récepteur Mas, un RCPG à sept domaines transmembranaires qui constitue un élément clé du bras protecteur du système rénine–angiotensine via une signalisation en aval de l’angiotensine-(1–7). L’activation de MAS1 module des voies de seconds messagers dépendantes des RCPG, notamment la signalisation liée à l’oxyde nitrique et aux prostaglandines, avec des effets en aval sur le tonus vasculaire, la signalisation inflammatoire et le remodelage tissulaire. Dans les cellules humaines, l’activité de MAS1 recoupe des voies qui contrôlent la fonction endothéliale, des programmes transcriptionnels associés à la fibrose et l’homéostasie cardiométabolique. Une expression ou une signalisation dérégulée de MAS1 a été étudiée dans des contextes tels que les pathologies cardiovasculaires et rénales, les états inflammatoires et les réseaux de signalisation associés au cancer, ce qui étaye sa pertinence comme cible mécanistique pour l’étude des voies de signalisation.

MAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.