Plasmide CRISPR d'Activation (h) MARCO: sc-402692-ACT

Le MARCO humain (macrophage receptor with collagenous structure) est un récepteur éboueur (scavenger) de classe A, exprimé principalement par les macrophages et par certains sous-ensembles spécialisés de cellules dendritiques. Il y assure la liaison et l’internalisation d’un large éventail de ligands polyanioniques, notamment des composants bactériens et des particules environnementales. En favorisant la phagocytose non opsonique et la capture de particules, MARCO contribue à la surveillance immunitaire innée, à la prise en charge des antigènes et à la régulation de la signalisation inflammatoire en aval des voies de reconnaissance des motifs. Des altérations de l’expression ou de l’activité de MARCO ont été associées à une activation dysrégulée des cellules myéloïdes et à une inflammation tissulaire, et il est fréquemment étudié dans le contexte des réponses immunitaires pulmonaires, de la biologie des infections et des phénotypes de macrophages associés aux tumeurs. En tant que récepteur de surface façonnant les interactions entre les cellules myéloïdes et le microenvironnement, MARCO est pertinent pour l’étude des interactions hôte–pathogène, du trafic des cellules immunitaires et du remodelage inflammatoire.

MARCO Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MARCO sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MARCO Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MARCO dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MARCO, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MARCO. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MARCO natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MARCO au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MARCO dans les cellules tumorales présentant une expression de MARCO silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.