Plasmide Double Nickase (m) MARCH8: sc-428061-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MARCH8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MARCH8 Double Nickase (m) et le plasmide MARCH8 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant March8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MARCH8 | sc-428061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) MARCH8 | sc-428061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
March8 code pour MARCH8, une ligase E3 ubiquitine de type RING-CH associée aux membranes, localisée principalement aux membranes endosomales et du réseau trans-Golgi, et qui régule, de manière dépendante de l’ubiquitination, le trafic et le renouvellement de multiples protéines de surface cellulaire et intracellulaires. En favorisant le tri médié par l’ubiquitine vers la dégradation lysosomale, MARCH8 contribue à contrôler l’abondance des récepteurs, les sorties de signalisation immunitaire et le contrôle qualité des protéines membranaires au sein du système endolysosomal. Dans des modèles murins, MARCH8 a été associée à des voies impliquées dans la présentation de l’antigène, la restriction immunitaire innée des virus enveloppés et la modulation des récepteurs de signalisation via des processus liés au protéasome dépendant de l’ubiquitine et aux lysosomes. Les dérégulations de l’ubiquitination et du trafic membranaire étant largement pertinentes pour des phénotypes inflammatoires et les interactions hôte–pathogène, March8 constitue un locus utile pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et de l’homéostasie protéique.
MARCH8 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus March8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de March8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de March8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de March8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.