Plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCH11 (h): sc-416041

Présentation

MARCH11 code une ligase E3 d’ubiquitine de la famille MARCH (Membrane-Associated RING-CH), localisée principalement aux membranes endosomales et sécrétoires, où elle favorise le tri de certaines protéines transmembranaires dépendant de l’ubiquitination. En régulant le trafic des cargaisons via l’endocytose et les voies de dégradation lysosomale, MARCH11 contribue à modeler la composition protéique de la surface cellulaire et la dynamique des membranes intracellulaires. Cette activité relie MARCH11 au contrôle plus large des réseaux ubiquitine–protéasome et endolysosomaux, des processus souvent impliqués dans la régulation immunitaire, les réponses au stress cellulaire et la signalisation oncogénique. Une ubiquitination dérégulée et un renouvellement anormal des protéines membranaires sont également associés à une signalisation des récepteurs altérée et à des défauts de protéostasie pertinents pour la biologie du cancer et d’autres contextes pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCH11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MARCH11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MARCH11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MARCH11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MARCH11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MARCH11 pour l'étude de la signalisation de MARCH11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MARCH11 essentiels à la fonction de MARCH11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MARCH11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MARCH11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MARCH11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MARCH11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MARCH11 plasmide HDR (h) et le MARCH11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MARCH11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MARCH11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.