MAP-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400282-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MAP-2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MAP-2ダブルニカースプラスミド（h）およびMAP-2ダブルニカースプラスミド（h2）は、MAP2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MAP-2 抗体 (A-4): sc-74421
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MAP-2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400282-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MAP-2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400282-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAP2は、微小管関連タンパク質2（microtubule-associated protein 2：MAP-2）をコードする遺伝子であり、神経細胞に豊富に発現する細胞骨格制御因子です。MAP-2は樹状突起内で微小管を安定化・束化し、神経突起伸長、樹状突起の分枝（樹状突起アーバー形成）、およびシナプス構造の維持を支持します。さらにMAP-2は、微小管ダイナミクスを細胞内輸送や活動依存的なリモデリングと結び付け、神経細胞の極性形成と可塑性を協調させるシグナル伝達経路を統合します。MAP-2の局在や発現の変化は、神経分化や樹状突起の健全性を評価する指標として広く用いられており、MAP2の機能異常は、実験モデルにおいて神経発達・神経精神疾患に関連する表現型と関連付けられています。代表的な樹状突起マーカーとして、MAP-2はストレス、炎症、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）の破綻など、神経回路の結合性に影響する攪乱に伴う細胞骨格構築の変化を研究する際にも頻繁に活用されています。
MAP-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。