Plásmido Doble Nickase (m) MAN1A1: sc-421551-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MAN1A1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MAN1A1 (m) y el plásmido de doble nickasa MAN1A1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Man1a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MAN1A1 | sc-421551-NIC | 20 µg | $410.00 |
Man1a codifica la alfa-1,2-manosidasa MAN1A1 residente en el aparato de Golgi, una enzima que recorta N-glicanos de alta manosa durante la maduración de las glicoproteínas. Este paso de procesamiento contribuye a la remodelación de los N-glicanos, lo que influye en el plegamiento y el tráfico de proteínas y en la composición de las glicoproteínas de la superficie celular, con efectos posteriores sobre la secreción, la función de los receptores y las interacciones célula–célula. La actividad de MAN1A1 se integra con los procesos centrales de glicosilación y control de calidad a lo largo de la vía secretora y puede modular la proteostasis y la señalización dependiente de glicanos. La N-glicosilación desregulada y la actividad alterada de las mannosidasas se asocian con frecuencia a fenotipos relevantes para la biología del cáncer, la neurobiología y la regulación inmunitaria, lo que respalda estudios mecanísticos del procesamiento de glicanos en estados celulares pertinentes para la enfermedad.
MAN1A1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Man1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Man1a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Man1a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Man1a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.