MAGE-C1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403336-ACT

Das humane Gen MAGEC1 kodiert MAGE-C1, ein Krebs/Hoden-Antigen, das überwiegend auf Keimzellen beschränkt ist, jedoch in malignen Erkrankungen häufig erneut exprimiert wird, wo es Tumorzellprogramme im Zusammenhang mit Überleben und Immunerkennung modulieren kann. MAGE-C1 gehört zur Typ‑I‑MAGE-Familie und wurde mit ubiquitinabhängiger Signalübertragung in Verbindung gebracht, unter anderem durch Interaktionen mit RING-Domänen-E3-Ubiquitin-Ligasen, wodurch Protein-Stabilität und Stressantwort-Signalwege beeinflusst werden. Eine fehlregulierte MAGEC1-Expression wurde sowohl in hämatologischen als auch in soliden Tumoren beschrieben und wird häufig als molekularer Marker für Antigenexpression und transkriptionelle Zustände in der Tumorbiologie verwendet. Die Untersuchung von MAGE-C1 unterstützt Forschungsarbeiten zur Antigenpräsentation, zur Regulation der Proteostase und zu Mechanismen der Transkriptionskontrolle, die für onkogene Phänotypen relevant sind.

MAGE-C1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAGEC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAGE-C1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAGEC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAGEC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAGE-C1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAGEC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAGE-C1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAGE-C1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAGEC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.