MAGE-A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401056-NIC

MAGEA1 codifica per MAGE-A1, un antigene cancro-testis normalmente limitato ai tessuti della linea germinale immunologicamente privilegiati, ma espresso in modo aberrante in molteplici tipi di tumore, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato dei programmi trascrizionali associati al tumore. MAGE-A1 può interagire con ligasi E3 dell’ubiquitina e con la relativa macchina di controllo qualità delle proteine, collegandosi così alla regolazione della stabilità proteica, alle risposte allo stress e al controllo dipendente dal contesto della segnalazione cellulare. La sua espressione è influenzata da meccanismi epigenetici come la metilazione del DNA e il rimodellamento della cromatina, mettendo in relazione MAGEA1 con vie che governano la repressione e la derepressione trascrizionale. In ambito di ricerca, MAGEA1 viene studiato per i suoi ruoli nella presentazione dell’antigene e nel riconoscimento immunitario, nella plasticità delle cellule tumorali e nel modo in cui la deregolazione epigenetica consente un’espressione genica inappropriata per la linea cellulare.

MAGE-A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAGEA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAGEA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAGEA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAGEA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.