MAFbx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400908

Visão geral

FBXO32 codifica a proteína humana de atrofia muscular do tipo F-box MAFbx (também conhecida como Atrogin-1), um componente de ligase E3 de ubiquitina do complexo SCF (SKP1–CUL1–F-box) que confere especificidade de substrato para a degradação proteassomal dependente de ubiquitina. A MAFbx é fortemente induzida durante estados catabólicos e contribui para a remodelação da proteostase ao direcionar reguladores da diferenciação e do crescimento muscular, conectando-se a vias a jusante de fatores de transcrição FOXO, da sinalização IGF-1/AKT e de respostas celulares ao estresse. Por meio de seu papel na atividade do sistema ubiquitina–proteassoma, FBXO32 é amplamente estudado em contextos de perda e remodelação muscular, incluindo atrofia associada à caquexia e perda muscular relacionada ao desuso. A atividade alterada de FBXO32/MAFbx também é relevante para compreender a adaptação do músculo esquelético, o estresse metabólico e entradas de sinalização inflamatória que convergem no turnover proteico.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MAFbx (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FBXO32 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FBXO32, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FBXO32 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MAFbx.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FBXO32 para a investigação da sinalização de MAFbx, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FBXO32 críticos para a função MAFbx
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FBXO32 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MAFbx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MAFbx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FBXO32. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MAFbx Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MAFbx (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FBXO32 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FBXO32 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.