MAFbx Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400908

Descripción general

FBXO32 codifica la proteína humana de atrofia muscular tipo F-box MAFbx (también conocida como Atrogin-1), un componente de la ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box) que confiere especificidad de sustrato para la degradación proteasomal dependiente de ubiquitina. MAFbx se induce de forma marcada durante estados catabólicos y contribuye a la remodelación de la proteostasis al dirigir a degradación reguladores de la diferenciación y el crecimiento muscular, lo que la vincula con vías aguas abajo de los factores de transcripción FOXO, la señalización IGF-1/AKT y las respuestas al estrés celular. A través de su papel en la actividad del sistema ubiquitina–proteasoma, FBXO32 se estudia ampliamente en contextos de desgaste y remodelación muscular, incluida la atrofia asociada a caquexia y la pérdida muscular relacionada con el desuso. La alteración de la actividad de FBXO32/MAFbx también es relevante para comprender la adaptación del músculo esquelético, el estrés metabólico y las entradas de señalización inflamatoria que convergen en el recambio proteico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MAFbx (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FBXO32 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FBXO32 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FBXO32 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MAFbx.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FBXO32 para la investigación de la señalización de MAFbx, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FBXO32 críticos para la función de MAFbx
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FBXO32 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MAFbx CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MAFbx CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FBXO32. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MAFbx (h) y el plásmido HDR MAFbx (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FBXO32 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FBXO32 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.