Plasmide CRISPR d'Activation (m2) MafB: sc-421335-ACT-2

Le gène murin **Mafb** code le facteur de transcription MafB, une protéine à fermeture éclair à leucines basique (bZIP) qui régule la spécification de lignée et la différenciation terminale des macrophages/monocytes, des cellules endocrines pancréatiques et des podocytes du rein en développement, via un contrôle spécifique de la séquence de l’expression génique. MafB agit au sein de programmes transcriptionnels et épigénétiques en aval de voies de signalisation du développement et de l’immunité, influençant la polarisation des macrophages, des réseaux répondant aux cytokines, ainsi que le maintien de la structure des podocytes et l’intégrité de la barrière de filtration. Une activité de Mafb dérégulée a été associée à une homéostasie immunitaire altérée et à des défauts d’organogenèse, et les variations d’expression de MafB sont fréquemment étudiées dans des modèles de lésion glomérulaire, de dysfonctionnement des îlots lié au diabète et de stress inflammatoire. L’édition génétique de **Mafb** chez la souris permet des études mécanistiques des circuits transcriptionnels, des décisions de destin cellulaire et des pathologies spécifiques de tissus, à l’aide de modèles in vivo, de cellules primaires et de systèmes de cellules souches différenciées.

MafB Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mafb sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MafB Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mafb dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mafb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MafB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mafb natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MafB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MafB dans les cellules tumorales présentant une expression de Mafb silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.