Plasmide CRISPR d'Activation (h) MafA: sc-401480-ACT

Le gène humain **MAFA** code MafA, un facteur de transcription à fermeture éclair à leucines (bZIP) qui se lie aux éléments de reconnaissance Maf afin de réguler les programmes de sécrétion d’insuline stimulée par le glucose et la maturation des cellules β pancréatiques. MafA intègre des signaux sensibles aux nutriments et au stress pour contrôler des réseaux transcriptionnels impliqués dans l’expression du gène de l’insuline, le fonctionnement des granules de sécrétion et le maintien de l’identité des cellules β. Une activité MAFA dysrégulée a été associée à une altération de la fonction des cellules β et à une différenciation endocrine modifiée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des circuits transcriptionnels associés au diabète et de la biologie des cellules des îlots. En tant que régulateur définissant une lignée, MafA est également utilisé pour explorer les réseaux de régulation génique qui gouvernent les décisions de destinée des cellules endocrines et l’homéostasie métabolique.

MafA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAFA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MafA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAFA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAFA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MafA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAFA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MafA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MafA dans les cellules tumorales présentant une expression de MAFA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.