Plásmido Doble Nickase (h2) MAD2B: sc-404007-NIC-2

El gen humano MAD2L2 codifica MAD2B (también conocido como REV7), una proteína con dominio HORMA que regula la estabilidad del genoma al participar en la síntesis de ADN por translesión mediante la ADN polimerasa ζ y al coordinar la tolerancia al daño del ADN durante el estrés replicativo. MAD2B también actúa dentro del complejo Shieldin para influir en la elección de la vía en la reparación de roturas de doble cadena, promoviendo la unión de extremos no homóloga y limitando la resección de los extremos del ADN, lo que configura las respuestas celulares a agresiones genotóxicas. A través de estas funciones, MAD2L2 influye en el control de los puntos de control, la reparación asociada a la replicación y el reclutamiento de factores de reparación asociados a la cromatina, procesos que con frecuencia se ven alterados en el cáncer y en otros trastornos vinculados a una reparación defectuosa del ADN. Las herramientas de investigación para MAD2L2/MAD2B respaldan estudios mecanísticos de la mutagénesis, el mapeo de interacciones de letalidad sintética y la evaluación funcional del sesgo de las vías de reparación en la edición génica y en ensayos de mantenimiento del genoma.

MAD2B El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAD2L2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAD2L2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAD2L2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAD2L2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.