mAChR M4 Double Nickase Plasmid (h): sc-402318-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das mAChR M4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- mAChR M4 Double-Nickase-Plasmid (h) und mAChR M4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRM4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mAChR M4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM4 kodiert den humanen muskarinischen Acetylcholinrezeptor M4 (mAChR M4), einen Gi/o‑gekoppelten GPCR, der die Adenylylcyclase hemmt, intrazelluläres cAMP reduziert und durch Modulation von Ionenkanalaktivität die neuronale Erregbarkeit sowie die synaptische Transmission mitprägt. Die mAChR‑M4‑Signalübertragung greift in cholinerge und dopaminerge Schaltkreise ein und beeinflusst nachgeschaltete Signalwege wie cAMP/PKA und MAPK/ERK, was zur Regulation der Neurotransmitterfreisetzung und der synaptischen Plastizität beiträgt. Eine veränderte CHRM4‑Expression oder Rezeptorfunktion wurde mit der Biologie neuropsychiatrischer und neurodegenerativer Erkrankungen in Verbindung gebracht, einschließlich Mechanismen, die für Schizophrenie, die Schaltkreise bei Morbus Parkinson und substanzkonsumbezogene Verhaltensweisen relevant sind. Diese Eigenschaften machen CHRM4 zu einem hilfreichen Ziel, um GPCR‑Signalgebung, neuromodulatorische Effekte auf Netzwerkebene sowie rezeptorabhängige transkriptionelle und elektrophysiologische Phänotypen in humanen Modellsystemen zu untersuchen.
mAChR M4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRM4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRM4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRM4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRM4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.