Plásmido Doble Nickase (h) mAChR M3: sc-400829-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)mAChR M3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa mAChR M3 (h) y el plásmido de doble nickasa mAChR M3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CHRM3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: mAChR M3 Anticuerpo (H-4): sc-518107
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) mAChR M3 | sc-400829-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) mAChR M3 | sc-400829-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM3 codifica el receptor muscarínico humano de acetilcolina M3 (mAChR M3), un receptor acoplado a proteína G que se acopla predominantemente a Gq/11 para activar la fosfolipasa Cβ, aumentar el Ca²⁺ intracelular y estimular la señalización dependiente de PKC. Mediante la hidrólisis de PIP2 y programas posteriores de MAPK y de transcripción, mAChR M3 regula la contracción del músculo liso, la secreción glandular y la excitabilidad neuronal. La actividad del receptor se integra con la homeostasis del calcio, la remodelación del citoesqueleto y redes de señalización vinculadas al ciclo celular que moldean la fisiología tisular y las respuestas al estrés. Las alteraciones en la señalización de CHRM3 se han investigado en relación con la función de las vías respiratorias y del tracto gastrointestinal, la regulación metabólica y contextos de señalización proliferativa relevantes para la investigación en oncología y neurobiología.
mAChR M3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRM3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRM3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRM3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRM3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.