Plasmide CRISPR/Cas9 KO MACF1 (m): sc-418945

Présentation

Macf1 code le facteur de liaison croisée microtubules–actine 1 (MACF1), une grande spectraplakine qui relie mécaniquement et fonctionnellement les microtubules au cytosquelette d’actine afin de coordonner la polarité cellulaire, la migration et le trafic intracellulaire. Dans les cellules de souris, MACF1 soutient le renouvellement des adhérences focales et le remodelage du cytosquelette, et a été associé à la signalisation Wnt/β-caténine via la régulation de la dynamique du complexe Axin, influençant des sorties de signalisation dépendantes du cytosquelette. En intégrant les réseaux d’actine et de microtubules, MACF1 contribue au développement neuronal, à l’organisation des tissus épidermiques et intestinaux, ainsi qu’aux réponses aux signaux mécaniques. La dérégulation des programmes cytosquelettiques associés à MACF1 a été étudiée dans des contextes tels que des phénotypes neurodéveloppementaux, l’intégrité des barrières et des comportements de migration de type métastatique pertinents pour des modèles de biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MACF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Macf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Macf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Macf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MACF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Macf1 pour l'étude de la signalisation de MACF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Macf1 essentiels à la fonction de MACF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Macf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MACF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MACF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Macf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MACF1 plasmide HDR (m) et le MACF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Macf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Macf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.