Plasmide CRISPR/Cas9 KO LZTR1 (h): sc-404531

Présentation

LZTR1 (leucine zipper–like transcription regulator 1) code une protéine de la famille BTB-Kelch, localisée principalement à l’appareil de Golgi, et agit comme adaptateur de substrat pour des complexes de ligase E3 à ubiquitine basés sur CUL3. En contrôlant, de manière dépendante de l’ubiquitine, la stabilité des protéines, LZTR1 module la signalisation de la voie RAS/MAPK en régulant le renouvellement et l’organisation spatiale des GTPases de la famille RAS ainsi que d’autres composants de signalisation associés. Ce gène est impliqué dans des processus cellulaires tels que la transduction du signal, la protéostasie et le trafic vésiculaire, avec des effets en aval sur les programmes de prolifération et de différenciation. Des altérations génétiques de LZTR1 ont été associées à des phénotypes liés aux RASopathies et à des contextes de susceptibilité tumorale, ce qui soutient son intérêt pour des études mécanistiques de la dérégulation de la signalisation RAS.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LZTR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LZTR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LZTR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LZTR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LZTR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LZTR1 pour l'étude de la signalisation de LZTR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LZTR1 essentiels à la fonction de LZTR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LZTR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LZTR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LZTR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LZTR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LZTR1 plasmide HDR (h) et le LZTR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LZTR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LZTR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.