LZTR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404531-ACT

LZTR1 (regulador de transcrição tipo zíper de leucina 1) codifica uma proteína adaptadora da família BTB-Kelch que se localiza no complexo de Golgi e atua em complexos de ligase E3 de ubiquitina baseados em CUL3 para regular a ubiquitinação e a degradação de proteínas. Tem sido implicado no controle da atividade da via RAS/MAPK por meio da modulação de proteínas da família RAS e de nós de sinalização relacionados que influenciam a proliferação, a diferenciação e a homeostase celular. Alterações na atividade de LZTR1 foram associadas a fenótipos de neurodesenvolvimento e predisposição a tumores, incluindo a síndrome de Noonan e a schwannomatose, tornando-o um alvo útil para estudar o controle da sinalização mediada por ubiquitina em células humanas. Como regulador ligado a vias de sinalização, LZTR1 apoia investigações mecanísticas sobre proteostase, centros de sinalização associados à membrana e relações genótipo–fenótipo.

LZTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LZTR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LZTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LZTR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LZTR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LZTR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LZTR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LZTR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LZTR1 em células tumorais com expressão de LZTR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.