Plasmide CRISPR d'Activation (h) LYPD2: sc-408607-ACT

LYPD2 (Ly6/PLAUR domain containing 2) code une protéine de surface cellulaire ancrée par GPI, appartenant à la famille Ly6/uPAR, impliquée dans la modulation des interactions avec des ligands extracellulaires et de la signalisation à proximité de la membrane. En tant que membre de la superfamille Ly6, LYPD2 est associé à des processus qui façonnent l’adhérence cellulaire, l’organisation des récepteurs et une transduction du signal dépendante du contexte au niveau de la membrane plasmique. Les profils d’expression dans des tissus épithéliaux et des tissus associés au système nerveux suggèrent des rôles dans la différenciation et l’homéostasie tissulaire, et une dérégulation a été rapportée dans des études de profilage moléculaire portant sur le cancer et d’autres maladies complexes. Ces caractéristiques font de LYPD2 une cible pertinente pour étudier la régulation des états cellulaires, les réseaux de protéines de surface et le remodelage des voies de signalisation dans des modèles de maladie.

LYPD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LYPD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LYPD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LYPD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LYPD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LYPD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LYPD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LYPD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LYPD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LYPD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.