Plásmido CRISPR de Activación (h) LTRPC7: sc-402820-ACT

TRPM7 (LTRPC7) codifica un canal‑quinasa bifuncional que conduce cationes divalentes, en particular Mg²⁺ y Ca²⁺, y acopla la homeostasis iónica con la señalización intracelular a través de su dominio quinasa de serina/treonina. La actividad de TRPM7 influye en el potencial de membrana, la dinámica del citoesqueleto y la adhesión y migración celular, integrándose con vías que regulan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. Mediante la regulación de procesos enzimáticos dependientes de Mg²⁺ y de la señalización vinculada a Ca²⁺, TRPM7 contribuye al control del metabolismo y la supervivencia celulares. La expresión o función desregulada de TRPM7 se ha asociado con una excitabilidad alterada y con programas de remodelación implicados en modelos de lesión neurológica, la fisiopatología cardiovascular y fenotipos de células cancerosas, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en genómica funcional.

LTRPC7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPM7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LTRPC7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPM7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPM7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LTRPC7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPM7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LTRPC7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LTRPC7 en células tumorales con expresión de TRPM7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.