LTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405150

Übersicht

Die Leukozyten-Rezeptor-Tyrosinkinase (LTK) kodiert eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die an wachstumsfaktorabhängiger Signalübertragung beteiligt ist und nachgeschaltete Kaskaden wie MAPK/ERK und PI3K/AKT moduliert, wodurch sie Zellproliferation, Differenzierung und Überleben beeinflusst. Die LTK-Aktivität wurde mit der Regulation sekretorischer und Trafficking-Programme in ausgewählten Zelltypen, einschließlich immunassoziierter Linien, in Verbindung gebracht, was mit Rollen in der Kontrolle von Zellzuständen übereinstimmt. Eine dysregulierte Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalgebung, einschließlich veränderter LTK-Expression oder Kinaseaktivität, ist für Untersuchungen onkogener Signalnetzwerke und linien- bzw. zelltypspezifischer Transformation relevant. Als kinasegekoppelter Oberflächenrezeptor wird LTK außerdem als Knotenpunkt genutzt, um Phosphotyrosin-Signalgebung, Rezeptor-Crosstalk und das Umverdrahten von Signalwegen unter genetischen Perturbationen zu analysieren.

Das LTK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LTK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LTK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LTK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LTK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LTK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LTK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LTK-Exone abzielen, die für die LTK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LTK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LTK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LTK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LTK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LTK HDR-Plasmid (h) und LTK HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LTK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LTK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.