Partículas Lentivirales de Activación (m) LTBP-3: sc-421482-LAC

Ltbp3 codifica la proteína 3 de unión al factor de crecimiento transformante beta latente (LTBP-3), una glucoproteína de la matriz extracelular que se une a complejos latentes de TGF-β y regula su secreción, almacenamiento y activación dentro del nicho pericelular. Al controlar la biodisponibilidad de TGF-β, LTBP-3 influye en programas transcripcionales dependientes de SMAD que gobiernan el comportamiento de las células mesenquimales, la remodelación de la matriz y la organización del patrón del desarrollo. En sistemas murinos, la actividad alterada de Ltbp3 se ha vinculado con una homeostasis desregulada del tejido conectivo y con defectos en el desarrollo esquelético, craneofacial y cardiovascular, lo que refleja el papel central de la señalización de TGF-β en la morfogénesis. Estas propiedades hacen de LTBP-3 un nodo útil para estudiar la comunicación cruzada entre la MEC y los factores de crecimiento, la mecanotransducción y la dinámica de la señalización en fibroblastos, linajes osteogénicos y células vasculares.

Las partículas de activación lentiviral LTBP-3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ltbp3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LTBP-3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ltbp3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LTBP-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ltbp3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.