LSR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401518-ACT

Der humane LSR (lipolysis stimulated lipoprotein receptor), auch als Angulin-1 bekannt, ist ein membranassoziiertes Protein, das an der Verarbeitung von Lipiden und Lipoproteinen beteiligt ist und zur Organisation epithelialer Barrieren an trikellulären Tight Junctions beiträgt. Durch die Koordination der Junction-Architektur und des Membrantransports beeinflusst LSR die Zellpolarität, die parazelluläre Permeabilität und die Gewebehomöostase in barrierebildenden Epithelien. Eine veränderte LSR-Expression wurde mit einer dysregulierten Lipidstoffwechselkontrolle und Barrierefunktionsstörungen in Verbindung gebracht – Prozesse, die für Entzündungen, Stoffwechselerkrankungen und tumorassoziierte Veränderungen der epithelialen Integrität relevant sind. Diese Funktionen machen LSR zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Wechselwirkungen zwischen Lipidwegen und junctionalen Signalnetzwerken zu untersuchen.

LSR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LSR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LSR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LSR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LSR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LSR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LSR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LSR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LSR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LSR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.