Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRSAM1 (h): sc-407099

Présentation

LRSAM1 (leucine-rich repeat and sterile alpha motif containing 1) code une ligase E3 de type RING de l’ubiquitine, cytosolique, qui contribue au contrôle qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine et au trafic endosomal grâce à ses interactions avec TSG101 et d’autres composants de la machinerie ESCRT. En régulant l’ubiquitination et le renouvellement de substrats spécifiques, LRSAM1 influence le tri intracellulaire, la dynamique membranaire et l’homéostasie neuronale. Une altération de la fonction de LRSAM1 a été associée à des neuropathies périphériques, dont la maladie de Charcot–Marie–Tooth de type 2P, soulignant son importance pour le maintien des axones et les voies de protéostase. LRSAM1 présente donc un intérêt pour l’étude de la signalisation par l’ubiquitine, du trafic vésiculaire et des réponses cellulaires au stress liées à la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRSAM1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LRSAM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LRSAM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LRSAM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRSAM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LRSAM1 pour l'étude de la signalisation de LRSAM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LRSAM1 essentiels à la fonction de LRSAM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LRSAM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRSAM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LRSAM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LRSAM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRSAM1 plasmide HDR (h) et le LRSAM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LRSAM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LRSAM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.