Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRN3 (m): sc-421473

Présentation

Lrrn3 code la protéine neuronale à répétitions riches en leucine 3 (LRRN3), une protéine transmembranaire de type I enrichie dans les tissus neuraux et impliquée dans la reconnaissance cellule–cellule, l’extension des neurites et la signalisation associée aux synapses. Par l’intermédiaire de ses domaines extracellulaires LRR, LRRN3 contribuerait à des processus de type adhésif et à la coordination de programmes de différenciation neuronale, influençant la formation des réseaux et la plasticité. Les profils d’expression relient également LRRN3 à certains états des cellules immunitaires, où elle est utilisée comme marqueur de la maturation des lymphocytes T et de l’épuisement fonctionnel, ce qui suggère un rôle dans le remodelage transcriptionnel associé à l’activation. Une dérégulation de l’expression de Lrrn3 a été rapportée dans des contextes neurodéveloppementaux et proches des maladies neurodégénératives, ainsi que dans des jeux de données d’immuno-oncologie, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques des signalisations neuronales et immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRN3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lrrn3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lrrn3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lrrn3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRRN3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lrrn3 pour l'étude de la signalisation de LRRN3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lrrn3 essentiels à la fonction de LRRN3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lrrn3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRRN3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LRRN3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lrrn3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRRN3 plasmide HDR (m) et le LRRN3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lrrn3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lrrn3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.