LRRC8D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406426

Übersicht

LRRC8D kodiert eine Untereinheit des volumenregulierten Anionenkanals (VRAC) mit leucinreichen Wiederholungen. VRAC ist ein heteromerer Komplex, der bei Zellschwellung aktivierten Anionenfluss vermittelt und zur Aufrechterhaltung der Zellvolumenhomöostase beiträgt. VRAC-Zusammensetzungen mit LRRC8D beeinflussen den Transport von Osmolyten und kleinen Anionen und können das Redoxgleichgewicht sowie zelluläre Stressantworten modulieren; sie greifen dabei in Prozesse wie Proliferation, Apoptose und inflammatorische Signalübertragung ein. In Immun- und Barrieregeweben wurde die VRAC-Zusammensetzung einschließlich LRRC8D mit der Regulation des Umgangs mit reaktiven Sauerstoffspezies und stimuliabhängigen Signalausgängen in Verbindung gebracht. Fehlregulierte VRAC-Aktivität und veränderte Expressionsmuster von LRRC8-Untereinheiten wurden in Zusammenhängen wie Krebsbiologie, metabolischem Stress und immunvermittelter Pathophysiologie untersucht, in denen Ionentransport- und oxidativer-Stress-Signalwege häufig umgebaut werden.

Das LRRC8D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LRRC8D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LRRC8D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LRRC8D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LRRC8D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LRRC8D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LRRC8D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LRRC8D-Exone abzielen, die für die LRRC8D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LRRC8D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LRRC8D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LRRC8D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LRRC8D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LRRC8D HDR-Plasmid (h) und LRRC8D HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LRRC8D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LRRC8D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.