Plasmide CRISPR d'Activation (h) LRP5: sc-401331-ACT

LRP5 (low-density lipoprotein receptor–related protein 5) est un co-récepteur transmembranaire à passage unique qui régule la signalisation canonique Wnt/β-caténine en s’associant aux récepteurs Frizzled afin de contrôler la transduction du signal dépendante du ligand. En modulant la stabilisation de la β-caténine et la transcription dépendante de TCF/LEF, LRP5 influence la différenciation des ostéoblastes, l’acquisition de la masse osseuse et, plus largement, des programmes gouvernant le destin cellulaire, la prolifération et l’homéostasie tissulaire. LRP5 participe également à des interactions croisées avec des antagonistes extracellulaires tels que DKK et la sclérostine, qui ajustent la sensibilité de la voie Wnt à la surface cellulaire. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de LRP5 sont associées à des troubles de la densité osseuse et du développement vasculaire oculaire, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des phénotypes induits par Wnt dans les cellules humaines.

LRP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRP5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRP5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRP5 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.