LRP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400638-ACT

LRP1（low-density lipoprotein receptor–related protein 1）は、多機能なエンドサイトーシス受容体でありシグナル伝達受容体でもあり、アポリポタンパク質E含有リポタンパク質、α2-マクログロブリン–プロテアーゼ複合体、細胞外マトリックス（ECM）関連因子など、多様なリガンドに結合します。受容体介在性の取り込みとトラフィッキングを制御し、細胞外プロテアーゼのクリアランスを調節するとともに、MAPK/ERK、PI3K/AKT、TGF-βなどの経路を介したシグナル伝達を細胞種依存的に統合・調整します。ヒトLRP1は脂質ハンドリング、細胞遊走、血管恒常性に影響し、アミロイドβ輸送やシナプス調節における役割を通じて神経生物学にも関与するとされています。LRP1の発現または機能の変化は、心代謝形質、動脈硬化関連プロセス、ならびにECMリモデリングや増殖因子シグナル伝達に関わる神経変性やがん関連メカニズムと関連しています。

LRP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LRP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LRP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LRP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLRP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LRP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLRP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLRP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLRP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLRP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。