Plasmide CRISPR d'Activation (m) LRP: sc-429657-ACT

La protéine Mvp de la souris code la LRP (major vault protein), principal composant structural des particules ribonucléoprotéiques « vault », impliquées dans le trafic cytoplasmique, le transport nucléocytoplasmique et la signalisation en réponse au stress. LRP interagit avec des voies qui régulent la gestion des xénobiotiques et l’homéostasie cellulaire, notamment les processus de transport des médicaments et de détoxification, et a été associée, dans certains contextes, à la modulation des réponses liées à PI3K/AKT et aux voies MAPK. Des modifications de l’expression de MVP/LRP ont été corrélées à des phénotypes de résistance multidrogue et à des changements de sensibilité à l’apoptose, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’adaptation des cellules tumorales et de la réponse aux traitements. Dans les systèmes immunitaires et épithéliaux, la biologie des particules vault est également liée aux programmes de défense innée et à la signalisation associée à l’inflammation, ce qui soutient son exploration dans des modèles de cancer et de réponse de l’hôte.

LRP Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mvp sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRP Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mvp dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mvp, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mvp natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRP dans les cellules tumorales présentant une expression de Mvp silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.