Plasmide CRISPR d'Activation (h) LONP1: sc-411273-ACT

LONP1 code la protéase Lon AAA+ de la matrice mitochondriale, un composant central du contrôle qualité des protéines mitochondriales, qui couple le dépliement dépendant de l’ATP à la protéolyse des protéines endommagées ou mal repliées. En régulant le renouvellement de sous-unités de la chaîne respiratoire et de facteurs associés au nucléoïde mitochondrial, LONP1 soutient la phosphorylation oxydative, le maintien de l’ADN mitochondrial et la réponse intégrée au stress mitochondrial. L’activité de LONP1 s’articule avec des voies qui régulent la protéostasie, l’homéostasie des ROS et l’apoptose, reliant le dysfonctionnement mitochondrial à des altérations du métabolisme et aux décisions de destinée cellulaire. Une expression ou une fonction dérégulée de LONP1 a été associée à des phénotypes de protéopathie mitochondriale et est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence, du remodelage métabolique des cellules cancéreuses et des mécanismes des maladies mitochondriales héréditaires.

LONP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LONP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LONP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LONP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LONP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LONP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LONP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LONP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LONP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de LONP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.