LMX1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402945-ACT

LMX1B codifica um fator de transcrição do tipo LIM homeobox que regula a especificação de linhagens celulares e a morfogênese de órgãos, com papéis marcantes no padrão dorsal dos membros, no desenvolvimento dos glomérulos renais e na diferenciação neuronal. No núcleo, LMX1B liga-se ao DNA por meio do seu homeodomínio e coordena programas transcricionais através de interações proteína–proteína mediadas pelo domínio LIM, moldando a identidade celular e redes gênicas do desenvolvimento. A atividade desregulada de LMX1B está associada a síndromes congênitas com alterações em unhas, esqueleto e rins, e sua expressão alterada tem sido investigada em contextos de disfunção de podócitos e fenótipos do neurodesenvolvimento. Como regulador do desenvolvimento, LMX1B é amplamente utilizado para estudar controle transcricional, lógica de enhancers e transições de destino celular em modelos celulares humanos relevantes.

LMX1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LMX1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LMX1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LMX1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LMX1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LMX1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LMX1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LMX1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LMX1B em células tumorais com expressão de LMX1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.